TROSYTROSY (Transverse relaxation optimized spectroscopy) — метод двумерной (2D) спектроскопии ЯМР, применяемый при изучении белков, для увеличения чувствительности и спектрального разрешения. Этот метод позволяет изучать большие молекулы и молекулярные комплексы. Применение ЯМР-спектроскопии для исследования больших молекул ограничено уширением спектральных линий, происходящем с ростом молекулярной массы. Большие молекулы имеют большие времена корреляции вращательного движения и, соответственно, короткие времена поперечной релаксации (Т2). Другими словами, сигналы ЯМР больших молекул спадают быстрее, что приводит к уширению линий и плохому разрешению. Вследствие непрямого диполь-дипольного взаимодействия, в отсутствии декаплинга пики на HSQC спектрах появляются в виде мультиплетов. Принципиально разные компоненты мультиплетов имеют различную ширину. Это происходит из-за конструктивного или деструктивного взаимодействия различных механизмов релаксации. Обычно в спектрах больших белков в высоких магнитных полях эффект поперечной релаксации (Т2) преобладает над диполь-дипольным (ДД) механизмом релаксации и механизмом анизотропии химических сдвигов (АХС). Механизмы релаксации обычно взаимосвязаны, но вклад в общую скорость релаксации от каждого компонента имеет свой знак, поэтому порядок релаксации разных компонентов мультиплетов различается. Эксперимент TROSY[1] создан для того, чтобы выбрать компоненты, для которых различные механизмы релаксации почти удалены, в результате чего сигналы на спектре оказываются узкими. Это приводит к значительному повышению как спектрального разрешения, так и чувствительности, что крайне важно при изучении больших и сложных биомолекул. Такой подход значительно расширяет диапазон молекулярных масс белков, которые могут быть изучены методом ЯМР, однако для достижения необходимого баланса между анизотропией химических сдвигов и диполь-дипольным механизмом релаксации, для проведения эксперименов TROSY, как правило, требуются высокие магнитные поля; диапазон анизотропии химических сдвигов меняется с напряженностью поля, в то время как константы диполь-дипольного взаимодействия от напряженности поля не зависят. Литература
|